СОСТОЯНИЕ ФУНКЦИЙ ПОЛИМОРФНО-ЯДЕРНЫХ НЕЙТРОФИЛОЛОВ ПРИ АТОПИЧЕСКИХ ДЕРМАТОЗАХ У ДЕТЕЙ

В.А. Мельник, Л.И. Слюсарь, Е.И. Беседина

Государственный медицинский университет им. М. Горького, г. Донецк, Украина

Введение. Как известно, аллергические заболевания непосредственно связаны с нарушениями в системе иммунитета. При этом разнородность аллергических реакций и болезней определяется рядом факторов, среди которых - характер аллергена, особенности т.н. "шоковой территории" тех или иных тканей и органов, реактивность организма, связанная, в частности, с функциональным состоянием нейтрофила и др. Существенность реализации функционального потенциала гранулоцитов в развитии и преодолении аллергических заболеваний аргументируется данными исследований ряда авторов [2, 3, 4].

Именно нейтрофилы представляют собой первую линию защиты от действия аллергенов различной природы. Отсюда судьба аллергена в организме во многом зависит от хемотаксической, метаболической и фагоцитарной активности полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПЯН). Более того, ввиду участия гранулоцитов практически во всех звеньях и формах воспалительно-аллергических процессов, исход аллергических болезней не отделим от функционального состояния ПЯН [7].

Извращению стимулированного ответа нейтрофилов способствует повышенная либо измененная чувствительность к гистамину рецепторов H-1 и H-2, через которые реализуются многие формы их участия в воспалении. Это в равной мере касается и beta-адренэргических рецепторов гранулоцита, изменения чувствительности которых свойственны аллергическим синдромам. Надо учитывать, что подобные сдвиги чувствительности beta-адренэргических рецепторов могут носить и системный характер. Наконец, нейтрофилы содержат фермент гистаминазу, которая является основным фактором дезактивации гистамина - главного медиатора аллергических реакций немедленного типа [1].

Таким образом, нельзя себе представить исчерпывающую картину патогенеза кожных проявлений аллергии вне углубленного изучения функции полиморфно-ядерных нейтрофилов.

В сравнительно небольшом количестве работ, касающихся функциональной активности нейтрофилов при аллергических заболеваниях, основное внимание сосредоточено на тех или иных нарушениях их эффекторных функций. Лишь в нескольких сообщениях отражены попытки выяснения механизмов развития этих сдвигов [5, 6, 8].

Изменения хемотаксиса ПЯН при атопическом дерматите обычно связываются как со сдвигами различной природы в клеточных структурах, так и с внеклеточными механизмами (воздействие веществ, которые активируют, либо угнетают продукцию хемотаксического фактора) [10]. Одной из причин расстройства хемотаксиса может явиться недостаточная чувствительность рецепторов нейтрофилов к хемотаксинам. Это, в свою очередь, тормозит гликолиз, снижает активность ГМФШ, дыхательных ферментов, необходимых в процессах генерации энергии для обеспечения подвижности клетки [2]. Выявлено также, что восстановление хемотаксиса сопровождается снижением активности внутриклеточного циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) [3].

Те или иные нарушения хемотаксиса и миграции ПЯН всегда регистрируются у больных с кожно-аллергическим синдромом [2, 3]. При наследственном первичном иммунодефиците с кожными проявлениями аллергии и синдромом "ленивых лейкоцитов" наблюдается замедление их миграции из костного мозга в кровь, связанное с функциональной несостоятельностью гранул ПЯН.

Исследование при помощи НСТ-теста у взрослых больных с атопией и без нее ключевого момента переваривания частиц в процессе фагоцитоза - активацию ГМФШ с результирующим "метаболическим (кислородным, респираторным) взрывом показало, что у трети пациентов с кожными проявлениями аллергии ими отмечен рост восстановления нитросинего тетразолия, свойственный лавинообразному повышению потребления кислорода, избыточному образованию перекисных радикалов и респираторному взрыву[10]. Информативность, техническая простота и доступность метода позволили авторам рекомендовать эту пробу для прогнозирования течения атопических заболеваний у детей. Можно полагать, что одной из причин различия выводов упомянутых работ является своеобразие реактивности организма, свойственное детскому возрасту.

Материалы и методы исследования: Под наблюдением находилось 112 детей с кожными проявлениями аллергии. Наряду с рутинными лабораторными (общий анализ крови, мочи, характеристика протеинограммы, при необходимости - фазовых показателей, содержание в сыворотке крови калия, натрия и др.), а также инструментальными исследованиями - ультразвуковая локация органов, рентген- и термография и др. было предпринято специальное изучение иммунного статуса.

Комплекс этих исследований включал определение основных параметров T- и B-лимфоцитов: их абсолютное и относительное содержание, субпопуляции и др. О состоянии фагоцитарной активности полиморфно-ядерных нейтрофилов судили по результатам постановки спонтанного и стимулированного зимозаном теста с нитросиним теразолием (НСТ-тест). Определялись кроме того спонтанная и стимулированная лимфокинами миграция лейкоцитов (РТМЛ), показатели иммунолейколиза нейтрофилов с пищевыми, бытовыми, инфекционными, вакцинальными и грибковыми антигенами (общее количество 20 - 25).

Устанавливали также содержание в сыворотке крови иммуноглобулинов M, G и А, циркулирующих иммунных комплексов и криоглобулинов, концентрацию гистамина и серотонина, определяли показатели перекисного окисления липидов (ПОЛ) - содержание в плазме крови диеновых конъюгат, малонового диальдегида, перекисного гемолиза эритроцитов.

Как правило, дети обследовались дважды: перед началом лечения и после него; часть пациентов - также в процессе катамнестического наблюдения (через 1 и 5-6 месяцев после завершения лечения). Конкретизированную норму по каждому из изученных показателей установили путем обследования 30 здоровых сверстников. Все лабораторные обследования проводились в условиях основного обмена.

Для характеристики иммунного статуса использовались следующие методики. Содержание Т-лимфоцитов определяли методом спонтанного розеткообразования (Е-РОК) по Jondal et al., 1972, В-клеток - в реакции (ЕАК-РОК) с эритроцитами барана по Mendes N.F. et al., 1973 в микромодификации Чередеева А.Н., 1976. Определение циркулирующих иммунных комплексов проводилось по методу Haskova et al., 1977. Содержание основных классов иммуноглобулинов сыворотки крови (Ig M, G, A) устанавливали методом радиальной иммунодиффузии в геле (Mancini G. et al., 1965). Тест повреждения нейтрофилов (иммунолейколиз) проводился по методике Фрадкина В.А.,1985 в микромодификации Майлян Э.А. и Прилуцкого А.С., 1991. Интенсивность ПОЛ оценивали путем определения в плазме крови содержания малонового диальдегида, уровня перекисного гемолиза эритроцитов (Stocks J., Dormandy T.), содержания диеновых конъюгат по методу Фолча, 1957 в модификации Шилиной Н.К. и Чернавиной Г.В., 1980. Тест с нитросиним тетразолием, как показатель процесса фагоцитоза нейтрофилов ставили по Нестеровой И.В. и соавт., 1989. Модификацию Зимина Ю.И. и Редькина А.П., 1987, использовали при постановке реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ).

Помимо конкретного анализа результатов исследования, вычисляли средний показатель по каждой из групп обследованных с определением его средней ошибки. При верификации отличий средних показателей различных групп использовали критерий Стьюдента (Гублер Е.В., 1986). Наличие коррелятивной связи между клинико-иммунологическими характеристиками при кожных проявлениях аллергии устанавливалось по методике, рекомендованной Каминским Л.С., 1964, с использованием прикладной программы на ЭВМ PC Pentium 100.

Результаты исследования и их обсуждение. Примечательно то, что преобладающая часть обследованных не прививалась вовсе, либо вакцинирована без соблюдения календаря прививок (84,8±2,68 % при 37,8±4,90 % - в контрольной группе). Наиболее часто несоблюдение календаря прививок объяснялось наличием ярких клинических проявлений аллергии либо только что перенесенным респираторно-вирусным заболеванием. К тому же у значительного количества детей с атопией при первой вакцинации возникали те или иные побочные реакции и/ или осложнения - значительное повышение температуры тела, появление сыпи, неврологической симптоматики, обострение основного заболевания. Подобные осложнения встретились у 58,0±3,69 % обследованных, при соответствующем показателе в общей популяции - 16,7±3,91 % (Р<0,05). Это позволило отнести указанный контингент детей ко второй группе вакцинального риска.

Мы сочли целесообразным предпослать анализу динамики функций ПЯЛ и других иммунных сдвигов, сопутствующих аллергодерматозу, сведения о некоторых особенностях при этом лейкоцитарной формулы. Данные обследования свидетельствуют о том, что периоду манифестации аллергодерматоза сопутствуют закономерные изменения количественных характеристик нейтрофильных гранулоцитов и эозинофилов. Так, наряду с некоторой тенденцией к уменьшению общего числа лейкоцитов, имело место статистически существенное падение абсолютного числа палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов (0,01±0,012 Г/л и 1,23±0,036 Г/л при норме 0,15±0,025 Г/Л и 2,51±0,166 Г/л) и еще более отчетливое повышение количества эозинофилов до 0,41±0,025 Г/л (при норме 0,11±0,001 Г/л), что может рассматриваться как свидетельство вероятной роли этих форменных элементов крови в механизмах развития аллергодерматоза.

В условиях традиционного лечения наблюдалось нарастание абсолютного количества нейтрофилов до нормы, тогда как соответствующий показатель числа эозинофилов еще более возрос до 0,57±0,064 Г/л). Так как это сопровождалось увеличением общего числа лейкоцитов, существенные сдвиги относительных характеристик лейкоцитарной формулы не возникали. При дополнительном назначении лития карбоната, кверцетина и димефосфона отмечено достоверное увеличение общего числа лейкоцитов, прежде всего за счет сегменто-ядерных нейтрофилов (4,93±0,200 Г/л). Абсолютный и относительный их показатели были не только выше исходных, но и несколько больше, чем у детей контрольной группы, а также тех, кто получал рутинную терапию. Что касается эозинофилов, то их число хотя и уменьшилось (0,32±0,041 Г/л), но все же существенно отличалось от отмеченного у здоровых детей, а также тех, кто не получал упомянутые иммуномодуляторы.

По современным данным сведения о спонтанном и стимулированном НСТ-тесте, а также характеристиках фагоцитарного резерва являются одними из наиболее важных показателей состояния неспецифической защиты организма, в частности, функциональной активности и потенции фагоцитов. Наши исследования показали, что обострение аллергодерматоза сопровождалось резким падением обоих измерителей теста с нитросиним тетразолием и уровня фагоцитарного резерва до, соответственно, 4,5±1,72 %, 30,7±4,15 % и 26,5±2,43 %, при норме - 10,4±2,17 % и 48,2±3,34 % и 37,8±2,24 % (Р<0,05).

При традиционном лечении средние показатели спонтанного НСТ-теста приблизились к конкретизированной норме, однако характеристики стимулированного НСТ-теста и фагоцитарного резерва (соответственно, 38,1+2,29% и 29,4+2,19%) оставались достоверно сниженными. Примечательно, что сколько-нибудь заметной тенденции к нормализации этих двух показателей не наблюдалось и спустя месяц после окончания лечения. Между тем, направленное лечение способствовало столь интенсивному нарастанию уровня стимулированного НСТ-теста, а также фагоцитарного резерва, что оба средних показателя (62,8±1,13% и 50,6±1,24%), были существенно выше не только сравнительно с отмеченными во время обострения и после рутинной терапии, но даже соответствующих конкретизированных нормативов.

Обратило на себя внимание и то, что при инфицировании кожных проявлений аллергии средний уровень спонтанного НСТ-теста не только не снизился, но даже несколько возрос (13,7±4,02%). Что касается динамики остальных изученных характеристик процесса фагоцитоза, то она повторяла отмеченную при обследовании детей с аллергодерматозом без признаков инфицирования высыпаний.

Исследование реакции иммунолейколиза наиболее часто обнаруживало причинную связь кожных проявлений аллергии с такими пищевыми антигенами, как яйцо и мясо курицы, коровье молоко, цитрусовые, рыба (перечень дан по убывающему значению). Среди прививочных антигенов чаще были значимыми коклюшный, дифтерийный, стобнячный, а из инфекционных - стафилококковый и кишечной палочки.

Та или иная степень отклонений от нормы показателей реакции торможения миграции лейкоцитов обнаруживалась более, чем у каждого 5-го здорового ребенка. Таким образом, само по себе повышение показателя РТМЛ еще не является свидетельством непременной склонности к развитию аллергического заболевания.

Кожным проявлениям аллергии, вне зависимости от характера "виновного" антигена, сопутствовало резкое уменьшение частоты нормальных показателей пробы (в среднем до 25,1±10,84 %, при норме 70,9±11,31 % (P<0,05). О выраженном нарушении подвижности

лейкоцитов свидетельствовало, в частности, и то, что в 14-ти из 16-ти групп, составленных с учетом изучаемого антигена, наблюдалось существенное уменьшение числа нормальных индексов миграции сравнительно с аналогичным показателем контрольной группы.

Если сопоставить сведения о частоте нормальных, сниженных и повышенных индексов миграции на высоте обострения аллергодерматоза с таковыми после рутинной и, соответственно, направленной терапии, можно констатировать, что при обоих вариантах комплексного лечения частота нормальных показателей возросла. Однако направленное лечение оказывало отчетливо более выраженное нормализующее влияние на результаты исследования, что является еще одним аргументом в пользу применения иммуномодулирующих препаратов в комплексной терапии детей с КПА.

Анализ данных проведенного исследования позволил констатировать у преобладающего большинства больных в разгаре кожных проявлений аллергии значительное падение спонтанной миграции лейкоцитов в среднем до 12,6±0,87 Ед шкалы микрометра при конкретизированной норме 22,0±1,72 Ед шкалы микрометра (Р<0,05).

По современным данным стабильность клеточных мембран, всегда страдающих при аллергодерматозе, во многом определяется соотношением интенсивности их повреждения в ходе процессов перекисного окисления липидов и достаточности антиоксидантной защиты.

Подобная дестабилизация мембран реализуется с помощью тех же оксидазных структур и активных форм кислорода, что и "респираторный взрыв", который представляет собой центральный момент такой функции гранулоцитов, как фагоцитоз. Выяснилось, что обострение кожных проявлений аллергии сопровождается отчетливыми сдвигами основных показателей ПОЛ - существенно возросли средний уровень в сыворотке крови малонового диальдегида, а также диеновых конъюгат (соответственно, до 4,93±0,236 Ед Е и 2,37±0,228 нм/мг белка при норме 3,17±0,272 Ед Е и 1,05±0,286 нм/мг белка). Столь же интенсивным был прирост и перекисного гемолиза эритроцитов. Этому сопутствовало достоверное падение уровня витамина Е, рассматриваемого как важный антиоксидантный фактор. Если учесть выраженность токсического воздействия дериватов ПОЛ на ряд ферментов и медиаторов, да и на организм в це лом, не приходится удивляться поражению при обострении аллергодерматоза структурных и функциональных свойств клеточных мембран. Традиционное лечение способствовало лишь умеренному и преходящему снижению интенсивности процессов ПОЛ, тогда как в ус ловиях дополнительного назначения таких иммуномодуляторов и адаптогенов как лития карбонат, кверцетин и димефосфон характеристики перекисного окисления липидов были нормальными даже спустя месяц после окончания лечения. Столь же заметным было

преимущество влияния направленной терапии и во влиянии на уровень в сыворотке крови витамина Е.

В ходе исследований была установлена тесная коррелятивная связь между уровнем гистаминемии (соответственно,серотонинемии) и рассмотренными выше характеристиками лейкоцитарной формулы, спонтанной и стимулированной миграции ПЯН, а также рядом других

показателей иммунитета и аллергии (r = - 0,79). Так пик нарастания концентрации шоковых ядов совпадал с максимумом торможения спонтанной миграции лейкоцитов, наиболее выраженной степенью сенсибилизации к причинно-значимым антигенам, а также особенной

интенсивностью реакции иммунолейколиза. Это подчеркивает роль биогенных аминов как фактора регуляции упомянутых процессов.

Выводы.

1. Манифестации кожных проявлений аллергии в детском возрасте свойственно существенное падение абсолютного числа нейтрофильных гранулоцитов и повышение количества эозинофилов. Это указывает на вероятную роль упомянутых элементов крови в механизмах развития болезни.

2. В разгаре гистамин- и серотонинзависимых аллергодерматозов имеет место достоверное нарастание концентрации в крови соответствующего биогенного амина. В случаях отчетливого сочетанного нарастания гистамин- и серотонинемии наблюдается особенно тяжелое и упорное течение болезни.

3. Обострение кожных проявлений аллергии сопровождается повышением степени сенсибилизации организма ребенка к причинно значимым аллергенам, характеризуемой с помощью реакции иммуно лейколиза, а также реакции торможения миграции лейкоцитов.

5. Периоду манифестации аллергодерматоза присуще выраженное угнетение фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов, связанное с регистрируемым с помощью НСТ-теста нарушением метаболического обеспечения ключевого момента фагоцитоза - кислородного взрыва.

6. При обострении аллергодерматоза наблюдается выраженное усиление деструкции клеточных мембран, о чем свидетельствует повышение уровня перекисного окисления липидов. Результаты проведенных исследований позволяют предположить вероятную роль при этом гистаминемии, которая способствует развертыванию процессов ПОЛ, а также подавлению активности лизосомальных ферментов.

7. Включение в комплекс традиционной терапии иммуномодуляторов и адаптогенов, влияющих на функцию нейтрофильных лейкоцитов: лития карбоната, димефосфона, кверцетина, способствует более быстрой и стойкой нормализации иммунного статуса, позволяет быстрее купировать обострение кожных проявлений аллергии, сократить сроки лечения, предупредить рецидивирование и увеличить продолжительность ремиссии, расширить контингент детей, которым может быть проведена вакцинация.

Список литературы

1. Балаболкин И.И. Атопический дерматит у детей// Вопр. охраны материнства и детства. - 1991. - Т.36, N4. - С. 74 - 78.

2. Бережная Н.М., Бобкова Л.П., Петровская И.А., Ялкут С.И. Аллергология: Словарь - справочник. - Киев: Наук. думка., 1986.- 447 с.

3. Бережная Н.М., Бейко В.А., Евсеева Т.А. Механизмы нарушения фагоцитоза нейтрофилами периферической крови при микробной аллергии// Иммунология. - 1983. - N2. - С. 69 - 71.

4. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз. - Киев: Наукова думка, 1988. - 192 с.

5. Воронцов И.М. Аллергические диатезы у детей//Педиатрия. - 1985. - N12. - С. 63 - 68.

6. Воронцов И.М., Маталыгина О.А. Болезни, связанные с пищевой сенсибилизацией у детей. - Л.: Медицина, 1986. - 271 с.

7. Долгушин И.И., Зурочка А.В., Власов А.В. Нейтрофилы как перспективные иммунокорректоры// Актуальные проблемы иммунологии. Иммунодефициты и иммунокоррекция. - Владивосток. - 1987. - С. 114 - 115.

8. Инамова Б.Л. Фагоцитарная активность нейтрофилов у детей с острой пневмонией на фоне экссудативного диатеза// Ташкент, 1980. - Ч.2 - С. 26 - 29.

9. Пазюк Е.А., Маянский А.Н. НСТ-тест в клинике инфекционно-аллергических заболеваний// Терапевт. архив. - 1981. - Т.53, N11. - С. 88 -124. Пазюк Е.А., Маянский А.Н. НСТ-тест в клинике инфекционно-аллергических заболеваний// Терапевт. архив. - 1981. - Т.53, N11. - С. 88 - 91.

10. Скрипкин Ю.К., Лезвинская Е.М. Хемотаксис нейтрофилов и его роль в патогенезе дерматозов//Вестн. дерматологии и венерологии. - 1986. - N6. - 31 - 37.

© Мельник В.А., Слюсарь Л.И., Беседина Е.И. Состояние функций полиморфно-ядерных нейтрофилов при атопических дерматитах у детей//Аллергические заболевания у детей: современные проблемы диагностики, терапии и реабилитации. Материалы научно-практической конференции. Декабрь, 1998. - Новосибирск, 1998. - C.23-30.